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色譜柱“早衰”——壽命太太太太短

儀器信息網 2019/08/16 09:42:08 點擊 101 次

色譜柱“早衰”——壽命太太太太短


我們都知道,液相色譜柱是耗材,一般一根色譜柱能使用500–1000針進樣或者更多,色譜柱的成本只占總分析成本的幾個百分點(其它分析成本還有:儀器折舊、溶劑采購和處置成本、制樣成本以及人工成本)。除了簡單沖洗外,任何其它修復一根已不能用柱子的努力,通常都不合算的。

然而,一根新柱子,使用50針進樣壽命畢竟還是太短了,值得花點時間解決這個問題。比如我們下面這個例子:

采用B型硅膠 C8 柱在40 °C下進行梯度分離,從甲醇/水到THF/水變化,流動相中含0.05% 三氟乙酸,并使用了保護柱。

分析物是聚合物提取物中的hindered胺,溶于甲苯而在甲醇中沉淀,進樣前所有樣品都經過過濾。

待測物沒有UV吸收,使用了氮化學發光檢測器,流動相不能含氮,所以不能用乙腈。進樣約50針后,胺的色譜峰消失了,峰消失的速度某種程度上取決于樣品基體中所含聚合物的類型, 酸性聚合物最糟糕。連續試了4-5根色譜柱,都發生了同樣情況。

使用者認為是聚合物隨時間的推移在色譜柱上積聚并不可逆地將胺粘在色譜柱內。用THF或二氯甲烷沖洗柱子,或者更換保護柱都不解決問題。他推測用強酸沖洗柱子會有用,但又擔心這樣對柱子帶來永久性的損害。"

常規上,普通的反相色譜清洗步驟是:先用50ml流動相中的水相連續沖洗,然后用100% 乙腈沖洗;如果不奏效,則再用二氯甲烷沖洗,對清除疏水污染物有用。用二氯甲烷沖洗后,在使用水性流動相前,必須再用乙腈沖洗確保去除殘留的二氯甲烷。如果你知道用某種特定的溶劑能溶解樣品組分,去試試也無妨,只要記住清洗溶劑序列中,當次用的溶劑必須能完全溶解在前一次用的清洗溶劑中。 

一般硅膠基質色譜柱pH耐受范圍是 2–8,但短時間沖洗,流動相pH可大大超過這個范圍。DolanJohn Dolan, LCGC專欄編輯曾故意用10ml近飽和NaOH溶液沖洗,試著去破壞一根色譜柱,但發現并沒有對色譜柱造成多大傷害。用低pH或高pH值清洗劑沖洗色譜柱往往能去除一些在色譜柱強保留的污染物。

Dolan推薦的清洗離子對試劑的配方:100 mL濃度為200 mM磷酸鹽緩沖液(pH 6), 與甲醇 50:50混合。使用這種混合物特別有效果,不過使用時須注意緩沖鹽析出,清洗之前和清洗之后,需用不含緩沖鹽的50:50甲醇/水過渡。

考慮到酸性聚合物吸附在色譜柱上的情況和離子對試劑類似,本案例,Dolan建議先試著用幾種不同溶劑沖洗。據Dolan的幾十年色譜經驗,僅用溶劑沖洗是不會傷害到色譜柱的。選擇最可能溶解這種聚合物的溶劑,然后試著用強酸堿流動相沖洗,如 0.2%三氟乙酸或者0.1M的NaOH。還不行,再考慮上面建議的沖洗離子對試劑污染的方法。

好的是,柱子已經損壞了,可以試驗各種不同清洗方法而不用擔心進一步傷害柱子,只要注意清洗時不能連接流通池。

本案例中,用戶通過試驗找到了恢復色譜柱性能的洗柱方法,先用了二氯甲烷和0.2%三氟乙酸的混合物沖洗色譜柱,去除了部分污染物,大約恢復了一半的胺色譜峰信號。然后用0.2%三氟乙酸和甲苯溶劑沖洗,100%的胺色譜峰得到了恢復。

根本的解決方案,在方法中把用0.2%三氟乙酸/甲苯清洗色譜柱結合進去,每批進樣結束后都進行一次這樣的洗柱。

結論:反相色譜保留機制中,除了疏水作用外,還存在多種其它作用,而殘留硅醇基的作用對反相色譜的選擇性中扮演重要角色,很多在硅膠基質反相色譜柱上能很好分離的應用,在聚合物基質色譜柱就很困難或根本分不開。 

本文編譯自《LCGC》雜志John Dolan的專欄文章

編譯:姚立新  納譜分析技術(蘇州)有限公司 總經理

曾任國內知名色譜耗材公司的聯合創始人及副總經理,成功開發過多系列的色譜耗材產品并實現其規模化生產和銷售。擁有7項已授權的中國國家發明專利,發表論文20余篇。熟知國內色譜耗材市場行情和發展趨勢,在該領域有十多年的市場營銷管理經驗。


[來源:納譜分析]
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